Наборы АмплиФЛЭШ для детекции мутаций

Применяемый в наборах вариант технологии TaqMan на основе разрушаемых олигонуклеотидных зондов с химическими модификациями LNA (locked nucleic acids) обладает высокой чувствительностью и специфичностью. В зависимости от общего количества ДНК в образце определяется до 1% мутантной ДНК на фоне геномной ДНК дикого типа с точностью не менее 99,9%. Характеристики набора позволяют воспроизводимо выявлять мутации, присутствующие в образце в низкой концентрации, сводя к минимуму вероятность ложноотрицательных результатов.

Нами разработаны и опробованы в лабораториях РФ наборы для онкогенов EGFR, KRAS, BRAF и др. Наборы совместимы со всеми распространенными реал-тайм амплификаторами: ABI 7300/7500/StepOne, Bio-Rad iQ5/CFX, Rotor-Gene 3000/6000, ДТ-96 и т.д.

Состав набора

•Готовые смеси для ПЦР (мастермиксы)
•Taq-полимераза
•Положительные контроли, содержащие 5% мутантной ДНК
•Деионизированная вода
•Инструкция (скачать пример в PDF-формате, 700Кб)

Принцип действия

В реакционную смесь введены два ДНК-зонда (комплементарные ДНК дикого типа и мутантной ДНК), каждый из которых содержит флуоресцентную метку (обычно FAM и VIC/HEX) и гаситель флуоресценции. В исходном растворе фоновая флуоресценция минимальна, но в результате проведения амплификации флуоресцентные красители высвобождаются, что позволяет детектировать наличие в амплифицированной смеси мутантной ДНК. Специальные условия амплификации и дизайн зондов позволяют добиться высокоспецифичного определения мутантной ДНК в одной реакционной пробирке.

По сравнению с аналогами применямая технология обладает широкими границами рабочих концентраций ДНК (от 0,5 нг до 300 нг на реакцию), что резко сокращает время анализа из-за отсутствия необходимости количественной калибровки образцов и позволяет избежать ложноположительных результатов, характерных для аллель-специфичной ПЦР при избытке ДНК.